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Affiliation de l’auteur : Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell’Abruzzo e del Molise « Giuseppe Caporale », Teramo, Italie (A. Lorusso, M. Spedicato, O. Portanti, M. Ancora, D. Di Sabatino, D. Morelli, P. Calistri, G. Savini ); Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Sardegna, Sassari, Italie (S. Cappai, F. Loi, L. Pinna, A. Ruiu, G. Puggioni); Istituto Zooprofilattico Sperimentale della Sicilia, Palerme, Italie (A. Guercio, G. Purpari, D. Vicari); Institut de la Recherche Vétérinaire de Tunisie, Tunis, Tunisie (S. Sghaier); Laboratoire de Santé Animale, Maisons–Alfort, France (S. Zientara, E. Breard, C. Sailleu); Université de la Manouba, Tunisie (S. Hammami); Commissariat Régional au Développement Agricole de Nabeul, Nabeul, Tunisie (T. Ben Hassine)
L’Organisation mondiale de la santé animale (WOAH) répertorie la maladie hémorragique épizootique (EHD) comme une maladie des ruminants sauvages et domestiques causée par le virus EHD (EHDV). L’EHDV est apparenté au virus de la fièvre catarrhale du mouton (BTV), l’agent étiologique de la fièvre catarrhale du mouton, une maladie des ruminants. Les deux virus appartiennent au genre Orbivirus et circule dans plusieurs sérotypes (1,2). Leur génome viral est constitué de 10 segments (S1-S10) d’ARN double brin ; la protéine structurelle de la capside externe (codée par S2) détermine la spécificité du sérotype. Les deux virus provoquent des symptômes cliniques similaires chez les bovins et sont transmis par les humains Culicoïdes spp. moucherons piqueurs. La fièvre catarrhale ovine affecte principalement les ovins et a été décrite à plusieurs reprises au cours des dernières décennies dans l’Union européenne (UE), provoquant un impact dévastateur sur le commerce des animaux (3). La plupart des épidémies de fièvre catarrhale du mouton en Europe proviennent directement d’Afrique du Nord en raison de la propagation par le vent des moustiques infectés par le BTV de cette région.1,4–7). Nous décrivons la détection de l’EHDV sérotype 8 (EHDV-8) chez les bovins en Italie, dans le prolongement de notre étude précédente sur l’EHDV-8 (n° d’accès GenBank OP381190–9) en Tunisie en 2021 (8).
Nombre
Nombre. Emplacements géographiques pour la détection du virus de la maladie hémorragique épizootique de sérotype 8, Italie, 2022. Les points rouges indiquent les emplacements des 4 exploitations concernées. Carte en médaillon détaillant les emplacements de 3 fermes…
Le 25 octobre 2022, une détresse respiratoire, une érosion du museau et de la muqueuse buccale et de la bave ont été signalées chez 3 vaches du ranch 1, situé près de la ville de Trapani, en Sicile (Image) ; Des échantillons de sérum et de sang total ont été prélevés. Le 28 octobre 2022, des signes cliniques consistant en un manque d’appétit, une cyanose et un œdème de la langue, une conjonctivite et de la fièvre ont été signalés chez les animaux de la ferme 2, située dans la municipalité d’Arbus en Sardaigne (Fig.). Le 3 novembre, l’animal est mort; des rates ont été prélevées à l’autopsie, ainsi que du sang total de 3 autres vaches symptomatiques de la ferme. Le 4 novembre, à la ferme 3 (dans la municipalité d’Arbus) et à la ferme 4 (près de la municipalité de Guspini), 3 vaches ont montré les mêmes signes et des échantillons de sang total et de sérum ont été prélevés (Fig). .
Nous avons testé 1 échantillon de sang EDTA par animal et un échantillon de rate pour l’ARN EHDV en utilisant le kit VetMAX EHDV (Thermo Fisher Scientific, https://www.thermofisher.com). Nous avons développé une PCR de transcription inverse en temps réel spécifique (rRT-PCR) pour S2 de la souche EHDV-8 détectée en Tunisie en 2021 (EHDV-8 TUN 2021) car le test disponible est conçu pour le segment S2 de l’EHDV-8 sérotype de référence ( isolé en Australie en 1982) n’a pas détecté EHDV-8 TUN 2021 (8). Les séquences nucléotidiques primaires étaient EHDV_Ser8varNEW_fwd AGAGATGAAGATCGCGAGGA et EHDV_Ser8varNEW_rev GAATCACACGCGCTCACTAA ; la séquence nucléotidique de la sonde est EHDV_Ser8varNEW_Probe FAM-ACGGATGAGATACGGAACATACGGGG-TAMRA. Nous avons préparé un mélange maître en utilisant TaqMan Fast Virus 1-Step (Thermo Fisher Scientific) et des concentrations finales de 400 nmol (primaire) et 200 nmol (sonde). Après avoir dénaturé l’ARN à 95 °C pendant 3 minutes, nous avons ajouté 5 μL d’ARN à 20 μL du mélange et réalisé l’amplification comme suit : 45 °C pendant 10 minutes, 95 °C pendant 10 minutes, puis 40 cycles de 95 °C pendant 15 secondes, et enfin 60°C pendant 1 minute. Nous avons réalisé le séquençage du génome entier (WGS) (9) dans l’échantillon sélectionné. Nous avons testé des échantillons de sérum prélevés sur tous les animaux avec l’ELISA ID Screen EHDV (Innovative Diagnostics, https://www.innovative-diagnostics.com), et par neutralisation virale (dix). Nous avons tenté d’isoler le virus en utilisant des échantillons de sang positifs à la rRT-PCR sur des cellules Vero (8).
Tous les échantillons d’animaux de Sardaigne et de Sicile étaient positifs pour l’ARN de l’EHDV (cycle seuil 23-28). Le génotype a confirmé la présence d’une souche de type EHDV-8 TUN 2021. Nous avons signalé le foyer au ministère italien de la Santé, qui a notifié WOAH et la Commission européenne, qui a imposé des restrictions sur les mouvements d’animaux dans un rayon de 150 km autour de le site de l’éclosion. Nous avons sélectionné 1 échantillon de sang positif à l’EHDV-8 de Sardaigne pour le WGS ; les résultats confirment que la souche sarde EHDV-8 (n° d’accès GenBank OP897265–74) partage une identité de séquence nucléotidique élevée (> 99,9 %) avec plusieurs souches de type EHDV-8 TUN 2021. Le WGS de la souche sicilienne est en cours. Nous avons isolé le virus de tous les échantillons de sang positifs à la rRT-PCR ; tous les échantillons de sérum ont été testés positifs par ELISA et neutralisation du virus (titre d’anticorps 10-20).
Nouvelle confirmation Orbivirus spp. une incursion dans l’UE renforcée par l’EHDV-8 est prévisible, compte tenu de la répartition de ce virus en Tunisie et très probablement dans les pays voisins (8). Le 18 novembre 2022, l’EHD a également été signalée dans la région andalouse d’Espagne, dans les villes de Cadix et de Séville. Il est difficile de prévoir des scénarios futurs pour les systèmes de production animale de l’UE, mais la JEP est susceptible de poser de nouveaux défis aux autorités vétérinaires de l’UE. Les leçons apprises avec la fièvre catarrhale ovine devraient servir de référence pour sélectionner les stratégies appropriées de contrôle et de prévention de la MEP. Dans l’ensemble, l’événement a également souligné l’importance pour les pays d’Europe d’avoir de solides collaborations avec les autorités d’Afrique du Nord en matière de santé publique et animale. La détection rapide de l’EHDV-8 en Sardaigne et en Sicile est le dernier exemple des avantages qu’une telle relation peut apporter. Cette collaboration s’est avérée importante; cela a conduit au développement d’un test moléculaire spécifique et précis pour la détection de l’EHDV-8, étant donné que la connaissance de la constellation génomique et de la liaison du génome de l’EHDV-8 aux sérotypes existants de l’EHDV a été atteinte. Le développement de vaccins doit être accéléré car la vaccination est la seule stratégie pour supprimer la propagation du virus et prévenir les pertes économiques directes et indirectes.
Lorusso est virologue et docteur vétérinaire à l’Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell’Abruzzo e del Molise « Giuseppe Caporale ». Ses intérêts de recherche incluent la surveillance et la caractérisation des virus d’importance pour la santé publique.
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